|
|
Gradual Molecular Changes in Primary Porcine Cells Expressing Mutated Huntingtin
Šmatlíková, Petra ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Trejbalová, Kateřina (oponent) ; Reiniš, Milan (oponent)
/ SÚHRN PRÁCE Huntingtonova choroba (HCH) je fatálne dedičné ochorenie spôsobené CAG tripletovými expanziami v géne huntingtínu, čo vedie k expresii mutovanej formy tohto proteínu (mtHtt). Hlavnými príznakmi HCH sú neurodegenerácia, osteoporóza, testikulárna degenerácia, strata svalového tkaniva a poruchy srdcového svalu, strata hmotnosti, metabolické zmeny a poruchy spánku. Vzhľadom k tomu, že proteín huntingtín (Htt) má úlohu vo viacerých biologických procesoch, mnoho molekulárnych mechanizmov ako oxidačný stres, mitochondriálna dysfunkcia, poškodenie DNA a iné, je ovplyvnených mtHtt. Avšak, patogénne mechanizmy mtHtt v HCH ešte nie sú veľmi dobre pochopené. Transgénny model miniprasaťa pre HCH (TgHD) ponúka možnosť izolácie neobmedzeného počtu primárnych buniek, a na rozdiel od primárnych buniek získaných od pacientov s HCH v neskorších štádiách ochorenia, TgHD miniprasací model umožňuje sledovať molekulárne zmeny vyskytujúce sa postupne s vekom a progresiou ochorenia. Takže TgHD model miniprasaťa a primárne bunky izolované z neho hrajú dôležitú úlohu pri skúmaní a pochopení základnej mechanickej príčiny HCH. Zamerali sme sa na molekulárne a bunkové zmeny v primárnych bunkách izolovaných z TgHD miniprasiat a ich wild type (WT) kontrol v rozličných vekových skupinách (24, 36 a 48 mesiacov). V...
|
|
|
Využití genomové editace k tvorbě velkých zvířecích modelů
Dvořáková, Nikola ; Ellederová, Zdeňka (vedoucí práce) ; Kašpárek, Petr (oponent)
Principem genového inženýrství je zásah do DNA studovaného organismu. Po objevu programovaných endonukleáz došlo k velké expanzi této techniky a otevřely se možnosti pro tvorbu velkých zvířecích modelů, které bylo donedávna velice obtížné vytvořit. Mezi tyto endonukleázy patří zinc finger nuclease (ZFN), transcription aktivátor like effector nuclease (TALEN) a CRISPR/Cas9, ve kterém se dnes skrývá velký potenciál pro tvorbu velkých zvířecích modelů. Všechny endonukleázy vytváří místně specifický sestřih v požadovaném úseku genomu. Tento sestřih se nejsnadněji opraví pomocí připojení nehomologních konců (NHEJ), a tak lze vytvořit tzv. knock-out (KO) model. Druhým typem opravy je homologní rekombinace (HR) využívající DNA templát s homologními rameny. Pomocí toho lze vytvořit knock-in (KI) model, který bez specifických endonukleáz nebylo možné u velkých zvířecích modelů vytvořit díky nízké přirozené HR. Tato práce shrnuje historii, techniku a využití programovaných endonukleáz pro tvorbu velkých zvířecích modelů. Tyto modely mají velké využití v biomedicíně, jsou nezbytnou součástí preklinického výzkumu, ale jsou také významné v zemědělství, a dokonce i v ochraně prostředí. Klíčová slova: velký zvířecí model, transgeneze, genomová editace, CRISPR/Cas9, TALEN, ZNF
|
host ::
RSS.